Shpjegimi i hollësishëm i paqëndrueshëm të reagentit në eksperimentet PCR

Shpjegim i hollësishëm i paqëndrueshmërisë së reagentit në eksperimentet e PCR.

Në eksperimentin PCR, pasi të kemi shtuar sistemin e reagimit, ne mbulojmë me kujdes kapakun dhe konfirmojmë në mënyrë të përsëritur që kapaku është i mbyllur për të shmangur paqëndrimin e reagentit. Por ndonjëherë kemi edhe dyshime: ne kemi konfirmuar që kapaku është i mbyllur fort, por pasi të përfundojë eksperimenti, reagenti do të avullojë akoma. cila eshte arsyeja?

Në fakt, volatilizimi i reagentit është një nga problemet më të zakonshme në eksperimentet e PCR, dhe ka shumë faktorë që ndikojnë në volatilimin e reagentit.

Avullimi i referohet asaj gjatë eksperimentit PCR, zgjidhja e reagimit avullon në temperaturë të lartë, dhe më pas kondensohet në murin e shisheve ose mbulesën e sipërme për të formuar mjegull uji ose pikat e ujit, ose të tejmbushet drejtpërdrejt nga hendeku i ajrit të kapakut ose filmit të shisheve, duke rezultuar në një ndryshim në përqendrimin e zgjidhjes së reagimit. Ndryshimet, sasia e zgjidhjes së reagimit u ul dhe disa madje avulluan në thatësi, duke rezultuar në eksperimente të pavlefshme.

1. Presioni i kapakut të nxehtë, temperatura

Në eksperimentet e PCR, ne zakonisht ngrohim kapakun për të parandaluar kondensimin e avullit të reagentit. Temperatura e kapakut të nxehtë është zakonisht më e lartë se ajo e zgjidhjes së reagimit për të parandaluar kondensimin e avujve.

Kapakët e ngrohjes së ciklit termik mund të ndahen afërsisht në katër llojet e mëposhtme: kapakët e ngrohjes jo të rregullueshme, kapakët e ngrohjes të rregullueshëm, kapakët e ngrohjes adaptive dhe kapakët automatikë të ngrohjes. Kapaku i nxehtë i rregullueshëm përmban kompresimin e ngushtë të gishtërinjve. Nëse nuk forcohen fort, reagentët do të avullojnë. Avullimi i skajit mund të minimizohet duke rritur presionin në kapakun e ndezur. Ndonjëherë mbivendosja mund të pinte tubin dhe të përdredh çelësin. Në rrethana normale, mbulesa elektrike e ngrohjes inteligjente mund të zbulojë automatikisht harxhime të lartësive të ndryshme, të kompresojë automatikisht harxhimet, dhe presioni është i njëtrajtshëm dhe i vazhdueshëm, duke zvogëluar kështu avullimin e reagentit dhe gabimet manuale dhe përmirësimin e saktësisë dhe përsëritjes eksperimentale.

2. Deformimi i harxhimeve

Për rrjedhjet e avullit, shumica e njerëzve mendojnë se presioni i kapakut të nxehtë nuk është i mjaftueshëm. Presioni i kapakut të nxehtë është shumë i rëndësishëm, por ky është vetëm një aspekt. Në fakt, harxhimet janë gjithashtu shumë të rëndësishme.

Pllaka me gojë PCR zakonisht bëhen nga materiale plastike, të cilat zgjerohen dhe deformojnë shumë pasi të nxehen. Shkalla e zgjerimit termik të bazës metalike PCR e përdorur për të vendosur pllakën e zbardhjes PCR është jashtëzakonisht e ulët, dhe pllaka e zbardhjes PCR nuk mund të zgjerohet normalisht përgjatë aeroplanit pas zgjerimit termik. Gjendja e fryrë e bën mbulesën e sipërme të nxehtësisë të paaftë për të kontaktuar plotësisht sipërfaqen e pllakës së zbardhjes PCR, duke rezultuar në temperaturë dhe presion të pabarabartë, duke shkaktuar avullimin e reagentit në buzë të pllakës së zbardhjes PCR, dhe duke ndikuar në efektin e zbulimit të PCR.

3. Konsumatorët nuk janë mbyllur fort

Shtrëngimi i kapakut termik dhe harxhimeve nuk do të thotë që kapaku i tubit PCR është i mbyllur fort, dhe cilësia e pllakës së pusit PCR është e pabarabartë. Konsumatorët me cilësi të lartë, sipërfaqja e grykës dhe mbulesa janë të lëmuara, dhe vula pas mbulesës së kutisë është e mirë, dhe nuk është e lehtë të rrjedhësh. Konsumatorët inferiorë kanë spouts të pabarabartë dhe linja radiale, të cilat lehtë mund të shkaktojnë rrjedhje ose edhe të thahen.

Prandaj, në eksperimentet e PCR, përpiquni të zgjidhni harxhime me cilësi të lartë dhe të përshtatshme. Në të njëjtën kohë, sistemi i reagimit mund të zgjerohet për të minimizuar ndikimin e avullimit të sistemit në reagim.